欧美精品无码一区二区三区,(无码视频)在线观看,久久久久久久精品免费看A片 ,疼死了大粗了放不进去

歡迎光臨北京和一生物科技有限公司網(wǎng)站!
誠信促進(jìn)發(fā)展,實(shí)力鑄就品牌
服務(wù)熱線:

18813176065

產(chǎn)品分類

Product category

技術(shù)文章 / article 您的位置:網(wǎng)站首頁 > 技術(shù)文章 > 不同細(xì)胞轉(zhuǎn)染技術(shù)的原理及區(qū)別

不同細(xì)胞轉(zhuǎn)染技術(shù)的原理及區(qū)別

發(fā)布時(shí)間: 2023-11-10  點(diǎn)擊次數(shù): 535次

常規(guī)轉(zhuǎn)染技術(shù)可分為兩大類,一類是瞬時(shí)轉(zhuǎn)染,一類是穩(wěn)定轉(zhuǎn)染(轉(zhuǎn)染)。前者外源 DNA /RNA不整合到宿主染色體中,因此一個(gè)宿主細(xì)胞中可存在多個(gè)拷貝數(shù),產(chǎn)生高水平的表達(dá),但通常只持續(xù)幾天,多用于啟動(dòng)子和其它調(diào)控元件的分析。一般來說,超螺旋質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染效率較高,在轉(zhuǎn)染后24-72小時(shí)內(nèi)(依賴于各種不同的構(gòu)建)分析結(jié)果,常常用到一些報(bào)告系統(tǒng)如熒光蛋白、β半乳糖苷酶等來幫助檢測(cè)。后者也稱穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,外源DNA既可以整合到宿主染色體中,也可能作為一種游離體(episome)存在。盡管線性DNA比超螺旋DNA轉(zhuǎn)入量低但整合率高。外源DNA整合到染色體中概率很小。大約1/104轉(zhuǎn)染細(xì)胞能整合,通常需要通過一些選擇性標(biāo)記,如來氨丙基轉(zhuǎn)移酶(APH;新霉素抗性基因)、潮霉素B磷酸轉(zhuǎn)移酶(HPH)、胸激酶(TK)等反復(fù)篩選,得到穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的同源細(xì)胞系。


轉(zhuǎn)染方法

原理

王要應(yīng)用

特點(diǎn)

DEAE-葡萄糖法

帶正電的DEAE-葡萄糖與核酸帶負(fù)電的磷酸骨架相互作用形成的復(fù)合物被細(xì)胞內(nèi)吞

瞬時(shí)轉(zhuǎn)染

相對(duì)簡(jiǎn)單、重復(fù)比磷酸鈣好,但對(duì)細(xì)胞有一定的毒副作用,轉(zhuǎn)染時(shí)需除血清且一般只用于BSC-1、CV-1、COS細(xì)胞系

磷酸鈣法

磷酸鈣DNA復(fù)合物吸附細(xì)胞膜被細(xì)胞內(nèi)吞

穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,染瞬轉(zhuǎn)染

不適用于元代細(xì)胞(所需的DNA濃度較高),操作簡(jiǎn)便但重復(fù)性差,有些細(xì)胞不適用細(xì)胞建議用CSCL梯度離心,轉(zhuǎn)染拷貝數(shù)較多

陽離子脂質(zhì)體法

帶正電的脂質(zhì)體與核酸帶負(fù)電的磷酸基團(tuán)形成復(fù)合物,然后脂質(zhì)體上剩余的電核與細(xì)胞膜上的唾液酸殘基的負(fù)電核結(jié)合;另一種解釋是通過細(xì)胞時(shí)內(nèi)吞左右而被進(jìn)入細(xì)胞。(若DNA濃度過高,中和脂質(zhì)體表面電核,而降低了與細(xì)胞的結(jié)合能力)

穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,瞬時(shí)轉(zhuǎn)染,所有細(xì)胞

使用方法簡(jiǎn)單,可攜帶大片段DNA,通用于各種類型的裸露DNA或RNA,能轉(zhuǎn)染各種類型的細(xì)胞,沒有免疫原性。雖在體外基因轉(zhuǎn)染中有很高的效率,但在體內(nèi),能被血清清除,并在肺組織內(nèi)累積,誘發(fā)強(qiáng)烈的抗炎反應(yīng),導(dǎo)致高水平的毒性,這在很大程度上限制了其應(yīng)用

陽離子聚合物

帶正電的聚合物與核酸帶負(fù)電的磷酸基團(tuán)形成帶正電的復(fù)合物后與細(xì)胞表面帶負(fù)電的蛋白多糖相互作用,并通過內(nèi)吞作用進(jìn)入細(xì)胞

穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,瞬時(shí)轉(zhuǎn)染,所有細(xì)胞

除了具有陽離子脂質(zhì)體的轉(zhuǎn)染效率高,操作簡(jiǎn)單,適用范圍廣,重復(fù)性好等特點(diǎn)外,還具有在體內(nèi),轉(zhuǎn)染效率高,細(xì)胞毒性低等特點(diǎn),是新一代的轉(zhuǎn)染試劑

病毒導(dǎo)法

逆轉(zhuǎn)錄病毒(RNA)

通過病毒中膜糖蛋白和宿主細(xì)胞表面的受體相互作用而進(jìn)入宿主細(xì)胞,之后反轉(zhuǎn)入酶啟動(dòng)合成DNA并隨機(jī)整合到宿主基因組中

穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,特定宿主細(xì)胞

可用于難轉(zhuǎn)染細(xì)胞、原代細(xì)胞,體內(nèi)細(xì)胞等,但攜帶基因不能太大(<8kb),細(xì)胞需處分裂期,需考慮安全因素


腺病毒(雙鏈DNA)

先和細(xì)胞表面的受體結(jié)合,繼而在整合素導(dǎo)下被細(xì)胞內(nèi)吞

穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,特定宿主細(xì)胞

可用于難轉(zhuǎn)染細(xì)胞,需考慮安全因素


Biolistic顆粒傳遞法(基因槍粒子轟擊法)

將DNA用顯微鏡金屬顆粒沉淀,再將包被好的顆粒用彈道裝置投射入細(xì)胞,DNA在胞內(nèi)逐步釋放、表達(dá)

瞬時(shí)性轉(zhuǎn)染,穩(wěn)定轉(zhuǎn)染

可用于:人的表皮細(xì)胞、纖維原細(xì)胞、淋巴細(xì)胞系以及原代細(xì)胞

顯微注射法

用顯微鏡操作將DNA直接注入靶細(xì)胞核

穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,瞬時(shí)轉(zhuǎn)染

轉(zhuǎn)染細(xì)胞數(shù)有限,多用于工程改造或轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的胚胎細(xì)胞

電穿孔法

高脈沖電壓破壞細(xì)胞膜電位,DNA通過膜上形成小孔導(dǎo)入

穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,瞬時(shí)轉(zhuǎn)染,所有細(xì)胞

適用性廣,除了質(zhì)粒外,還可轉(zhuǎn)染大的基因組(>65kb)但細(xì)胞致死率高, DNA和細(xì)飽用量大,需根據(jù)不同細(xì)胞類型優(yōu)化電穿孔實(shí)驗(yàn)條件,拷貝數(shù)較少


1-20

 

 

 

聯(lián)


男男做a爱过程免费视频| 特级毛片www| 国产麻豆一精品一av一免费| 99国内精品久久久久久久| 色妺妺av欧ooxxooxx| 人妻互换免费中文字幕| 大号bbwassbigav女| 艳妇臀荡乳欲伦交换| 色翁荡息又大又硬又粗又爽小玲| 性少妇videoxxx欧美69| 中文无码一区二区三区在线观看| 国产精品成人无码A片免费软件| 不许穿内裤随时挨c调教h| 精品一区二区三区无码AV| 女人被强╳到高潮喷水在线观看| 最近中文字幕MV高清在线视频| 肉乳床欢无码a片120秒厨房里| 亚洲精品乱码久久久久久中文字幕| 精品国产乱码久久久久久免费| 超清精品丝袜国产自在线拍| 热の综合热の国产中文网| 亚洲成av人片在线观看天堂无码| 奇米综合四色77777久久麻豆 | 欧美高清性色生活片免费观看| 亚洲精品午夜国产va久久成人| 中文字幕av伊人av无码av| 超碰CAOPOREN97人人| 欧美激情乱人伦| 免费视频网站在线看视频| 青苹果乐园在线观看| 免费网站观看www免费下载| 两女女百合互慰av赤裸无遮挡 | 国产真实伦熟女实例hd| 爆乳美女午夜福利视频| 精品无码中文视频在线观看| 麻麻张开腿让我爽了一夜| 女人18毛片a级毛片| 狂野欧美性猛交XXXX| 富婆一对一刺激交友| 风间中文字幕亚洲一区| 歪歪爽蜜臀AV久久精品人人槡|